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更新時間：2025-06-22
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關鍵詞:DLD Diagnostika GmbH
上海拜力生物DLD Diagnostika GmbH品牌代理經營進口胎牛血清、細胞因子、ELISA試劑盒、細胞、抗體、生物試劑、耗材、培養(yǎng)基、一抗、二抗、其產品吸附均勻，吸附性好，空白值低，孔底透明度高，代做ELISA實驗等。完善的庫存及供應體系以及高效穩(wěn)定的純化技術，保證產品均能現貨供應和產品質量的穩(wěn)定性。
怎樣查到一個特定細胞株的相關知識和培養(yǎng)條件？
ATCC（American Type Culture Collection）收集了絕大多數細胞的詳細資料。打開ATCC網頁的Cells and hybridomas鏈接，輸入細胞名稱就可以搜索ATCC的細胞數據庫。數據庫中有每一種細胞的詳細描述，包括細胞的來源，培養(yǎng)和凍存條件，以及相關文獻等資料。
如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基？
培養(yǎng)某類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣容易生長。總之，*MEM、DMEM做貼壁細胞培養(yǎng)；RPMI1640做懸浮細胞培養(yǎng)；各種目的無血清培養(yǎng)*AIMV培養(yǎng)基（SFM）。
測序實驗流程：
1 收集樣品
2 相關試劑 總RNA提取試劑TREzol Reagent (RNA提取試劑), M-MLV(cDNA逆轉錄酶), RNA 純化試劑, RealqPCR MasterMix (熒光定量PCR預混試劑)。
3 實驗儀器 熒光定量PCR儀; PCR儀;低溫離心機。
4 總RNA提取
5 cDNA合成 在0.5ml的離心管中加入1µl模板總RNA(1µg/µl); 2µl隨機引物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水至15µl體系。混勻后70℃變性RNA 5分鐘，冰上速冷1分鐘，離心將溶液收集至管底加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水至30µl體系。PCR儀中反應條件設置 37℃延伸60min，70℃保溫15min終止反應。合成好的cDNA置于 -20 ℃保存?zhèn)溆谩?br style="box-sizing: border-box; margin: 0px;"/>6 引物設計與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
7 實時定量PCR 按以下反應體系進行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上游引物F 1 ul，下游引物R 1 ul;cDNA template 2ul。定量PCR儀擴增反應條件設置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循環(huán))。
8 PCR產物溶解曲線分析 將所擴增的PCR 產物進行溶解曲線分析，單峰溶解曲線表示擴增產物單一，無非特異性擴增產物。溶解曲線生成的反應程序為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。
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