常用抗體綜述,二抗應用實例分析

       為分析二抗的使用情況，我們隨機抽取了100篇2007年或2008年發(fā)表于Science 或 Journal of Biological Chemistry雜志上的 文章（英文），這些文章涵蓋了來自于16個國家的約80個研究機構。收集的數(shù)據(jù)顯示二抗的使用非常廣泛，可以應用到幾乎所有類型的免疫檢測中，尤其是Western blot、免疫組織化學和免疫細胞化學。事實上，二抗在ELISA及流式細胞術中應用也很廣泛，不僅用于科學研究，而且廣泛的應用于臨床分析和疾病診斷。比較而言，二抗在免疫沉淀中的應用相對較少。以下內容是基于對所收集的二抗信息進行統(tǒng)計分析后得出的一些結論，對于您在具體的實驗中如何選擇的抗體具有借鑒作用。

選擇二抗時，您必須考慮到以下因素，如一抗的物種、產生二抗的宿主、一抗的類別或亞類、二抗所耦聯(lián)的探針類型及二抗的形式（如整個IgG分子，F(xiàn) （ab’） 2片段，或Fab片段）等等。因此選擇哪種類型的二抗很大程度上決定于您所使用的一抗是什么，尤其針對種屬和類別而言。

通常情況下，一抗可以在山羊、小鼠、兔子、大鼠及綿羊體內制備，其中屬小鼠及兔子zui為常見，相應的，二抗的種屬也應當與一抗的相一致。而對于制備二抗的宿主，則應選擇另外一種不同的動物，一般選用驢、山羊、兔子、綿羊或其他較大的動物，可以實現(xiàn)二抗的大規(guī)模制備，其中又屬山羊使用zui多。

對于二抗類別或亞類的選擇，應遵循與一抗類別或亞類相一致的原則，其中抗IgG使用zui多。這可能是因為除了五種類別的單克隆抗體外，很多一抗是多克隆抗體，屬于IgG類免疫球蛋白。此外anti-IgG可以識別幾乎所有類型的IgG亞類，因此，在不清楚一抗是屬于那個類別或亞類的時候，anti-IgG抗體是個不錯的選擇。從我們的數(shù)據(jù)來看，值得注意的是， IgG亞類特異性的二抗（如抗IgG1, 抗IgG2, 抗IgG2a, 抗IgG2b）通常用于雙標記實驗中，包括免疫細胞化學、免疫組織化學及流式細胞術。

此外，整個IgG分子是zui常用的一種二抗分子形式，而F （ab’） 2片段或Fab片段一般僅用于特殊實驗中，如需要避免抗體與具有Fc受體的細胞結合的情況，或需要封閉內源性免疫球蛋白的時候。

對于二抗所耦聯(lián)的探針的選擇，主要取決于具體的實驗。對于Western blot，zui常用的探針是辣根過氧化酶（HRP），堿性磷酸酶（AP）的使用也很多，但不如HRP使用廣泛。此外，IRDye （如 IRDye 680、IRDye 800） and Alexa Fluor dye （如Alexa 680 ） 等系列染料也偶爾應用于 western blot當中。通過統(tǒng)計分析發(fā)現(xiàn)，來自于Amersham Biosciences、Bio-Rad、Cell Signaling、GE Healthcare Bio-Science、Jackson ImmunoResearch Laboratories、LI-COR Biotechnology、Pierce Biotechnology、Santa Cruz Biotechnology、Sigma 及 Zymed Laboratories公司的HRP標記的二抗在Western blot中均有廣泛使用；而對于AP標記的二抗，您可以選擇Jackson ImmunoResearch Laboratories、Sigma、Bio-Rad 及DAKO公司。

對于免疫熒光檢測實驗（包括免疫細胞化學及免疫組織化學），應用zui廣泛的是耦聯(lián)有Alexa Fluor系列染料的抗體（如Alexa Fluor 488, 546, 568, 594, 596, 647, 633）、花青染料（Cyanine）系列標記的抗體（如Cy2, Cy3, and Cy5）、FITC及羅丹明（Rhodamine）。其中對于Alexa Fluor標記的二抗，推薦選擇Invitrogen 公司或Molecular Probes公司（現(xiàn)屬于Invitrogen公司），是的生產Alexa Fluor染料的公司。從我們收集的數(shù)據(jù)來看，Jackson Immunoresearch Laboratories公司的花青染料（Cyanine）系列標記的二抗使用較多，而對于FITC，Jackson Immunoresearch Laboratories、Santa Cruz Biotechnology、DAKO 及Sigma公司均可選擇。Bio-Rad、Chemicon、Invitrogen或Sigma公司的羅丹明標記的二抗使用較好。另外，如果你想放大檢測信號，你可以選擇生物素標記的二抗，Jackson Immunoresearch Laboratories、Vector Laboratories 或R&D Systems均是不錯的選擇。

對于流式細胞術，F(xiàn)ITC是選用zui多的標簽，PE標簽也可以使用。

對于ELISA實驗，HRP 和 AP標簽使用zui多。

在免疫沉淀中，二抗的使用并不是很多，但偶爾也有使用，如用于蛋白的分離，一般選擇無耦聯(lián)標記的二抗。