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    飼養層細胞的培養

    更新時間:2012-12-03點擊次數:730

    一、主要實驗材料

    1、培養液為F-DMEM。

    2、小鼠周齡為7~8w的性成熟母小鼠和周齡為8w的種公鼠。

    二、小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)的培養

    1、小鼠胚胎的準備

    ①性成熟母小鼠與種公鼠按1公(♂):2母(♀)比例合籠。

    ②每天早上觀察母小鼠陰道口。有乳白色或蛋黃色凍膠狀物(陰道栓)即確定為懷孕。

    ④見栓當天上午定為懷孕的0.5d。

    ③取懷孕12.5~14.5d母鼠,斷頸處死,無菌條件下暴露子宮。餿用鑷子提起近子宮頸端,分離子宮系膜,剪斷子宮角。

    ⑤取出整個子宮,在無菌濾紙上吸干血跡,置于有PBS或無血清DMEM平皿內。用PBS洗滌三次,棄除表面殘余血跡。

    ⑥沿子宮系膜側剪開子宮,取出帶有胎膜的胚胎,置于另一盛有PBS或無血清DMEM平皿內,充分洗滌,棄除表面紅細胞。

    ⑦用小鑷子撕破胎膜,取出胎鼠,棄除胎膜,用PBS洗滌三次。

    ⑧去除胚胎頭部、內臟和四肢,將軀干部置于另一盛有PBS或無血清DMEM平皿內,用PBS至少洗滌三次,充分棄除紅細胞。

    2、小鼠胚胎成纖維細胞(MEF)的培養


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