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    更新時(shí)間:2018-10-11點(diǎn)擊次數(shù):477

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    ●分子實(shí)驗(yàn)中常用生化試劑原理匯總● 1.溶菌酶:它是糖苷水解酶,能水解菌體細(xì)胞壁的主要化學(xué)成分肽聚糖中的β-1,4糖苷鍵,因而具有溶菌的作用。當(dāng)溶液中pH小于8時(shí),溶菌酶作用受到抑制。葡萄糖:增加溶液的粘度,維持滲透壓,防止DNA受機(jī)械剪切力作用而降解。 EDTA:(1)螯合Mg2+、Ca2+等金屬離子,抑制脫氧核糖核酸酶對(duì)DNA的降解作用(DNase作用時(shí)需要一定的金屬離子作輔基);(2)EDTA的存在,有利于溶菌酶的作用,因?yàn)槿芫傅姆磻?yīng)要求有較低的離子強(qiáng)度的環(huán)境。 2.NaOH-SDS液: NaOH:核酸在pH大于5,小于9的溶液中,是穩(wěn)定的。但當(dāng)pH>12或pH<3時(shí),就會(huì)引起雙鏈之間氫鍵的解離而變性。在溶液II中的NaOH濃度為0.2mo1/L,加抽提液時(shí),該系統(tǒng)的pH就高達(dá)12.6,因而促使染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性。 SDS:SDS是離子型表面活性劑。它主要功能有:(1)溶解細(xì)胞膜上的脂質(zhì)與蛋白,因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜。(2)解聚細(xì)胞中的核蛋白。(3)SDS能與蛋白質(zhì)結(jié)合成為R-O-SO3-…R+-蛋白質(zhì)的復(fù)合物,使蛋白質(zhì)變性而沉淀下來(lái)。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取過(guò)程中,必須把它去除干凈,防止在下一步操作中(用RNase去除RNA時(shí))受到干擾。 3. 3mol/L NaAc(pH4.8)溶液: NaAc的水溶液呈堿性,為了調(diào)節(jié)pH至4.8,必須加入大量的冰醋酸。所以該溶液實(shí)際上是NaAc-HAc的緩沖液。用pH4.8的NaAc溶液是為了把pH12.6的抽提液,調(diào)回pH至中性,使變性的質(zhì)粒DNA能夠復(fù)性,并能穩(wěn)定存在。而高鹽的3mol/L NaAc有利于變性的大分子染色體DNA、RNA以及SDS-蛋白復(fù)合物凝聚而沉淀之。前者是因?yàn)橹泻秃怂嵘系碾姾桑瑴p少相斥力而互相聚合,后者是因?yàn)殁c鹽與SDS-蛋白復(fù)合物作用后,能形成較小的鈉鹽形式復(fù)合物,使沉淀更*。 4.為什么用無(wú)水乙醇沉淀DNA?用無(wú)水乙醇沉淀DNA,這是實(shí)驗(yàn)中常用的沉淀DNA的方法。乙醇的優(yōu)點(diǎn)是可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會(huì)起任何化學(xué)反應(yīng),對(duì)DNA很安全,因此是理想的沉淀劑。 DNA溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在,當(dāng)加入乙醇時(shí),乙醇會(huì)奪去DNA周圍的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般實(shí)驗(yàn)中,是加2倍體積的無(wú)水乙醇與DNA相混合,其乙醇的終含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇來(lái)替代無(wú)水乙醇(因?yàn)闊o(wú)水乙醇的價(jià)格遠(yuǎn)遠(yuǎn)比95%乙醇昂貴)。但是加95%的乙醇使總體積增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA損失也增大,尤其用多次乙醇沉淀時(shí),就會(huì)影響收得率。折中的做法是初次沉淀DNA時(shí)可用95%乙醇代替無(wú)水乙酵,后的沉淀步驟要使用無(wú)水乙醇。也可以用0.6倍體積的異丙醇選擇性沉淀DNA。一般在室溫下放置15-30分鐘即可。

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    檢測(cè)范圍:歡迎QQ或電話索取原版說(shuō)明書(shū).
    產(chǎn)品規(guī)格:96T/48T。
    主要成分:酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等
    經(jīng)營(yíng)種類:進(jìn)口分裝和原裝、國(guó)產(chǎn)
    性狀:盒裝液體
    試劑盒保存:2-8℃低溫保存。
    標(biāo)本:血清、、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
    ELISA常用的方法:雙抗體夾心法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法以及BAS-ELISA等。
    預(yù)期應(yīng)用:ELISA法定量測(cè)定血清、、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中的含量。

     

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    ●檢測(cè)試劑盒利用的是競(jìng)爭(zhēng)法的原理●:樣品中未知量的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合包被在微孔中的抗體結(jié)合位點(diǎn)上。溫育后洗板以終止競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)。加入底物液后,溶液所顯示的顏色強(qiáng)度與樣品中抗原的量成反比。樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上直接獲取。

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    編輯:小檀20181011

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